產(chǎn)品詳情
簡(jiǎn)單介紹：
輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒公司擁有專(zhuān)業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)，以科研為宗旨，在生物試劑、科研耗材領(lǐng)域內(nèi)獨(dú)樹(shù)一幟，能為生命科學(xué)領(lǐng)域的廣大科研人員提供數(shù)萬(wàn)種抗體、數(shù)千種蛋白以及相關(guān)檢測(cè)試劑盒等。
詳情介紹：
輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
需自備的儀器和用品:
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
注意事項(xiàng):
1、如果一次性測(cè)定樣本數(shù)較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。
2、對(duì)照管和測(cè)定管的測(cè)定步驟的區(qū)別:對(duì)照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測(cè)定管
加完試劑一、二、三、四和五后必須反應(yīng)20min后再加試劑六。
3、反應(yīng)過(guò)程中注意避光。
4、若NAD+測(cè)定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH測(cè)定中△A(A2-A1)≤0.0222,說(shuō)明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測(cè)限,可做如下調(diào)整:(1)將測(cè)定管避光靜置時(shí)間20min延長(zhǎng)到60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取0.2g樣本或0.2mL樣本加入1mL提取液。
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要?dú)涫荏w,生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時(shí),形成大量的ROS,同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細(xì)胞呼吸耗氧量較高,處于過(guò)氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。
測(cè)定原理:
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過(guò)PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(lán)(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測(cè)吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。需自備的儀器和用品:
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
注意事項(xiàng):
1、如果一次性測(cè)定樣本數(shù)較多,可將試劑一、二、三和四按比例配成混合液。
2、對(duì)照管和測(cè)定管的測(cè)定步驟的區(qū)別:對(duì)照管加完試劑一、二、三、四和五后必須馬上加試劑六;測(cè)定管
加完試劑一、二、三、四和五后必須反應(yīng)20min后再加試劑六。
3、反應(yīng)過(guò)程中注意避光。
4、若NAD+測(cè)定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH測(cè)定中△A(A2-A1)≤0.0222,說(shuō)明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測(cè)限,可做如下調(diào)整:(1)將測(cè)定管避光靜置時(shí)間20min延長(zhǎng)到60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取0.2g樣本或0.2mL樣本加入1mL提取液。
5、由于每一個(gè)測(cè)定管需要設(shè)一個(gè)對(duì)照管,本試劑盒100管保證測(cè)48個(gè)NAD+或NADH.